更新時間:2024-09-26
多重熒光免疫組化檢測與顯色法多重免疫組化不同,多重熒光免疫組化(mIHC)是基于酪胺信號放大( Tyramide Signal Amplification,TSA)技術,可實現(xiàn)在同一組織切片樣本上對多個靶標進行區(qū)別標記,進而分析組織微環(huán)境中蘊含的復雜信息。
多重熒光免疫組化檢測(mIHC):
主要的技術原理來自TSA技術,TSA即酪酰胺信號放大(Tyramide signal amplification)是一類利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白或核酸進行高密度原位標記的酶學檢測方法。
多重熒光免疫組化檢測技術可與高性能染料Alexa Fluor®、傳統(tǒng)熒光染料和比色檢測系統(tǒng)相兼容。 TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的過氧化物酶反應(酪胺鹽在HRP催化H202下形成共價鍵結合位點),產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物,該產(chǎn)物能與周圍的蛋白殘基(包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基)結合,這樣在抗原-抗體結合部位就有大量的生物素沉積,與隨后加入的Streptavidin—HRP/熒光基團結合,經(jīng)幾次這樣的循環(huán)放大,可以結合大量的酶分子or熒光基團,結果使其檢測信號得到幾何級放大。
多重熒光免疫組化檢測優(yōu)勢:
1.高科研價值:分人、鼠兩個系列,方便在小鼠腫瘤模型和人樣品上進行平行實驗,進行轉化醫(yī)學研究;
2.高兼容性:選用熒光染料標記適用于所有配備了紫外、FITC、CY3、CY5 等波段帶熒光的顯微鏡、共聚焦顯微鏡和熒光切片掃描設備;
3.穩(wěn)定性:加樣過程無需避光操作,樣品染色完4度保存半年,-20℃保存一年,熒光依然滿足拍照需求;
4.方便性:所有抗體都經(jīng)過篩選,特異性好,染色濃度均經(jīng)過優(yōu)化,減少研究者自己摸條件的過程。
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