實驗原理:
1.成骨誘導的過程是使鈣離子能夠以鈣鹽的方式沉淀下來,即“鈣結節(jié)",鑒定鈣結節(jié)的染色方法常用茜素紅染色法。
2.茜素紅:茜素磺酸鈉,茜素s,茜素紅s,茜素胭脂紅,1,2-二羥基蔥醒-3-磺酸鈉,1,2-二羥基蔥醒-3-磺酸鈉鹽。橙黃色或黃棕色粉末。易溶于水,微溶于乙醇,不溶于苯。1%水溶液pH為2.15,其水溶液呈前黃褐色,加鹽酸后變?yōu)辄S色,加氫氧化鈉后則變成藍紫色。有刺激性。能與許多金屬離子生成有色化合物,能與錯、釷、鋁、鈦及鈣發(fā)生顯色反應。
3.染色原理:茜素紅與鈣發(fā)生顯色反應,產生一種深紅色的帶色化合物,這樣成骨誘導的細胞外面沉積的鈣結節(jié)也就被染成了深紅色。
實驗試劑及儀器:
1.試劑:PBS10醛緩沖液0.1%茜素紅-Tris-HCL染液蒸餾水
2.儀器:倒置顯微鏡
實驗步驟:
1.棄培養(yǎng)液,PBS沖洗2次
2.10%甲醛緩沖液固定10min
3.蒸餾水沖洗3次
4.加入0.1%茜素紅-Tris-HCL染液(pH8.3),37℃下染色30min
5.蒸餾水沖洗
6.在倒置顯微鏡下觀察有無茜素紅染色陽性細胞
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